南宫28猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒的用户手册

产品信息

【产品名称】
通用名：猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒
英文名：Blocking ELISA Kit For Detection of Antibodies to Classical Swine Fever Virus

包装规格

96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

预期用途

猪瘟是由猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus，CSFV）引起的一种高度传染性、出血性且致命的疾病，其特点包括高热、微血管壁变性、广泛性出血、坏死及梗塞等。 本试剂盒用于检测猪血清中的猪瘟病毒抗体，适用于评估猪瘟病毒疫苗的免疫效果。

试剂盒组成

储存及有效期

请在2～8℃的条件下保存，保质期为12个月。已开封的包被板应在2～8℃避光保存，避免潮湿，使用期限为2个月。

适用仪器

需配备630nm波长的酶标仪、37℃恒温设备和可调微量移液器。

样品准备

1. 获取动物全血，待血液凝固后以4000r/min离心10分钟，收集血清；或待血液自然凝固后收集血清，确保血清清亮且无溶血。
2. 用样品稀释液将待检血清按1:1稀释（例如：将100μl血清加入100μl样品稀释液中并混匀）。阴性和阳性对照无需稀释。
3. 使用前，将浓缩洗涤液恢复至室温并稀释至工作洗涤液（20倍稀释），如有结晶请加热溶解。建议按顺序先稀释血清至稀释板后，再转移到抗原包被板上，以确保反应时间一致。

检验方法

1. 使用前将试剂盒在室温下恢复30分钟。
2. 取所需数量的酶标板条，设定阴性和阳性对照各2孔，未用的板条应密封并存于2～8℃。每孔加入300μl工作洗涤液，甩掉，重复洗涤2次，最后拍干。
3. 在阴阳性对照孔中分别加入100μl阴阳性对照，样品孔中加入100μl稀释后的样品。
4. 混匀后盖好盖板膜，置于37℃（建议水浴）避光反应2小时。
5. 甩去孔内液体，加300μl工作洗涤液，重复洗涤5次，最后一次拍干。
6. 每孔加入100μl酶标记物，盖好膜，置于37℃避光反应30分钟。
7. 按照上述步骤进行洗涤。
8. 每孔加入100μl底物显色液，在室温（20～25℃）避光反应10分钟。
9. 每孔加入50μl终止液，混匀，10分钟内于630nm测定各孔吸光值。

参考值

实验正常情况下，阴性对照的平均OD值应≥0.6，阳性对照的平均OD值应≤0.5。

结果判定

1. PI（阻断率）=（1 - OD样品 / OD阳性对照）× 100%。
2. PI≥40%为阳性；PI<40%为阴性。
3. 当结果为阴性时，显示猪只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。

试验方法的局限性

本实验仅作为定性检测猪血清、血浆中猪瘟病毒抗体，PI值的高低可粗略评估抗体水平的强弱。

注意事项

1. 操作时必须佩戴手套和工作衣，并严格执行消毒隔离制度，所有实验废弃物需按传染物处理。
2. 终止液具有腐蚀性，避免接触皮肤与衣物，如不慎接触请立即用大量水冲洗。
3. 如果试剂盒阴阳性对照、酶标记物出现少量悬浮物属于正常现象。
4. 从冷藏环境中取出的酶标板应恢复至室温后再开袋，未用完的板需放入干燥剂密封袋中保存。
5. 注意浓缩洗涤液在低温下易结晶，使用前需恢复至室温完全溶解。
6. 洗涤时确保各孔充满液体，以防孔口有游离酶未能洗净。
7. 用于检测的样品应保持新鲜。
8. 结果判定必须以酶标仪读数为准。
9. 不同批号的试剂组分不得混用。