实验原理是利用脂类染料（如苏丹黑或油红O等）对血清脂蛋白进行预染，然后将预染后的血清置于琼脂糖凝胶板上进行电泳分离。通电后，脂蛋白会向正极移动并分离成几个区域带。

试剂与器材：

1. 巴比缓冲液（pH 8.6，离子强度 0.075）：电极缓冲液包含巴比/妥钠 154 g，巴比/妥 276 g，EDTA酸 0.292 g，加水溶解后定容至 1000 ml。

2. 三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH 8.6）：凝胶缓冲液含三羟甲基氨基甲烷 121.2 g，EDTA酸 0.29 g，NaCl 158.5 g，加水溶解后定容至 1000 ml。

3. 琼脂糖凝胶：琼脂糖 0.45 g，三羟甲基氨基甲烷缓冲液 50 ml，水 50 ml，加热至沸腾，待琼脂糖完全溶解后立即停止加热。

4. 挖槽工具：制作切口刀：刀口长 15 mm 的刀片，中央夹一有机玻璃或木片，用螺丝固定，确保两刀片相距 15 mm。挖槽小匙使用直径 15 mm 的铜丝约 6 cm 长，一端锤成扁平状并用砂纸磨光。

5. 电泳槽及电泳仪：与血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳仪器相同。

操作步骤：

1. 预染血清：将血清 0.2 ml 和苏丹黑染色液 0.2 ml 混合后置于 37℃水浴中染色 30 分钟，然后进行离心（2000 转/分，约 5 分钟）。

2. 制备琼脂糖凝胶板：将已配置的 0.45% 琼脂糖凝胶在沸水浴中加热融化，用吸管将凝胶溶液浇注于载玻片，每片 25 ml，静置约 30 分钟后凝固（天气炎热时需延长时间，可放入冰箱数分钟加速凝固）。

3. 点加血清：在已凝固的琼脂糖凝胶板一端约 2 cm 处，用切口刀片垂直切入凝胶后立即取出，然后用铜丝小匙将长方形小条凝胶取出。用小片滤纸吸干小槽中的水分，使用血色素吸管吸取经过预染的血清约 15 μl，注入凝胶板上的小槽中。

4. 电泳：将加过血清的凝胶板平行放入电泳槽中，样品应在阴极一端。用三层纱布浸润巴比/妥缓冲液后轻轻贴在凝胶板两端，另一端浸于电泳槽内的巴比/妥缓冲液（注意：此电极缓冲液不能用三羟甲基氨基甲烷缓冲液代替）。接通电源，电压设定为 120~130 V，每片电流为 3~4 mA。约经过电泳 15 至 55 分钟，即可观察到分离的色带。

注意事项：

1. 电泳样品要求为新鲜的空腹血清。

2. 每块凝胶上可平行挖两条小槽，因此可加入两个样品。

3. 如果使用形状和小槽相同的有机玻璃片，在琼脂糖凝固前固定在适当位置，凝固后取出有机玻璃片，凝胶板上将留下小槽以直接加样，而无需挖槽。

4. 如需保留电泳样本，可将电泳后的凝胶板（连同玻片）放入清水中浸泡脱盐 2 小时，然后置于烘箱中（约 80℃）烘干。

结果及临床意义：

1. 正常人血清脂蛋白可出现三条区带，从负极到正极依次为β-脂蛋白（最深）、前β-脂蛋白（最浅）、α-脂蛋白（比前β-脂蛋白略深些），在原点处应无乳糜微粒。

2. 如果前β-脂蛋白比α-脂蛋白深，结合血清甘油三酯明显升高及胆固醇正常或略高，可诊断为Ⅳ型高脂蛋白血症。

3. 如果β-脂蛋白区带比正常血清明显深染，同时结合血清总胆固醇显著增高、甘油三酯正常者为Ⅱa型；若结合血清总胆固醇增高而甘油三酯略高的前β略溶者为Ⅱb型。

4. 倘若β-与前β-两区带分离不开，连在一起称为“宽β区带”，结合血清甘油三酯和胆固醇均有所增高，可定为Ⅲ型。

5. 如果原点处出现乳糜微粒，且β、前β均正常或降低，结合血清甘油三酯明显增高，则可定为Ⅰ型。

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