粒曼专注于提供细胞体外基因编辑解决方案，尤其是细胞基因敲除的定制服务。目前，我们提供多种细分的敲除服务，欢迎联系南宫28团队获取技术路径及成功案例资料。

南宫28为真核细胞提供定制的体外基因敲除服务。我们定期更新Q&A，以更好地服务我们的客户。以下是Q&A【2503版】中的部分问题：

基因敲除定制服务相关问题

如何验证基因敲除是否成功？

精准敲除与模糊敲除的区别

(1) 精准敲除：通过同源重组（HDR，Homology-Directed Repair）机制，在目标基因中引入精确的修饰，例如特定片段的删除、点突变或插入，从而完全或部分失活基因功能。与一般的基因敲除方法不同，精准敲除需要特定的实验策略。

(2) 模糊敲除：通过非同源末端连接（NHEJ，Non-Homologous End Joining）机制，在目标基因的特定区域随机引入插入或缺失（Indel）突变，从而导致基因编码框的移位或提前终止，最终破坏基因功能。

CRISPR/Cas9可以敲除的最大片段范围是多少？

理论上，可以敲除1kb-1Mb范围的片段。结合多靶点切割技术或其他技术联用（如CRISPRa/i、表观遗传修饰），可实现超大片段的敲除（1Mb）。

如何提高原代细胞编辑效率？

使用病毒载体，如慢病毒或AAV整合至基因组，电场诱导细胞膜穿孔，针对贴壁或悬浮的原代细胞进行优化转染。

如何提高基因敲除效率？

如何分析基因敲除后的表型变化？

如何区分纯合敲除与杂合敲除？

CRISPR RNP法适用的细胞及场景有哪些？

结语

CRISPR/Cas9 RNP基因编辑法已成为细胞基因编辑的前沿技术。该方法通过将靶基因对应的多条体外合成的single-guide RNA（sgRNA）与Cas9蛋白混合形成核糖核蛋白复合物（RNP），以“瞬时”转染的方式送入细胞内，进而高效而稳定地进行基因编辑。在南宫28的支持下，这一方法不仅提高了基因编辑的效率，还尽量减少了脱靶效应和基因组不稳定性。随着CRISPR/Cas9 RNP法的逐渐普及，它正全面替代传统的基因编辑方法。